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ATCC菌种使用说明

ATCC菌种使用说明及培养方法:
菌种名称:金黄色葡萄球菌   
规格:300ul甘油菌    
类别:金黄色葡萄球菌    
抗性:无    
培养基:LB     
培养方式:37℃,有氧     
保存方式:30%甘油,-­‐80℃    
菌株简介:在LB平板上菌落呈金黄色或为白色,大而突起,圆形,不透明,表面光滑,周围有溶血圈。在Baird-­‐Parker平板上呈现圆形,光滑凸起,湿润。显色呈灰色到黑色,边缘为淡色。经革兰氏染色显色其为革兰氏阳性。经无菌水10倍稀释,涂平板,37℃培养过夜未见其他微生物生长,经可见金黄色葡萄球菌菌落。         
操作方法:                                     
1、从泡沫盒中取出菌冻干管,置于超净台中。                                     
2、去除冻干管上的封口膜,然后将冻干管在酒精灯上烧一下灭菌。                                     
3、准备好无抗性的LB平板,往冻干管中加入适量的LB培养基,用接种环四区划线,37℃过夜培养。                                     
4、挑取单菌落进行扩大培养。                                    
5、冻存菌株,做好标记。         
冷冻管开封:用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。         
菌株复溶:无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖,吸取1ml 左右复溶液,加入到冷冻管中。轻轻振荡,使冻干菌株溶解呈悬浮状。    
菌株复壮:用无菌吸管吸取菌悬液,转移到复溶液滴瓶中。做好标识,在适宜温度下培养。细菌在30-­‐35℃培养箱中培养24-­‐48h,真菌在23-­‐28℃培养箱中培养24-­‐72h(必要时,可适当延长培养时间)。         
菌株传代:将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽量增大接种量:如用无菌吸管吸取≥50μl新鲜培养物至固体培养基,边移动边缓慢释放),适宜温度下培养,用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。         
注意事项:    
1、菌种活化前,将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中,长时间室温下放置会导致菌种衰退;    
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行;    
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,部分需连续两次继代培养才能正常生长;     
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基,敬请正确选择,不清楚时来电询问;     
5、某些厌氧菌的培养,自开封到接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧状态;培养过程中亦要保持厌氧状态;    
6、某些菌种,如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-­‐10%CO2    促进生长;     
7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况,应停止使用对应产品。    
8、部分菌种有致病性、扩散性,请专业人员在专业环境下有保护性操作。         
保藏条件:-­‐20℃保存(复溶液于2-­‐8℃保存)         
保藏时间:2-­‐10    年,应根据菌种状况及时转接