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细胞培养常见问题及解决方法

细胞培养
<细胞培养>
细胞生长缓慢的原因有:
1、生长培养基使用不当:按照生产商的建议,使用相应的预热生长培养基。
2、生长培养基中血清质量差:使用其他批次血清。
3、传代操作不当:按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。
3、换液过于频繁:降低换液频率,参考生产商推荐的换液频率。
4、细胞传代次数过多:使用传代次数较少的健康细胞。
5、细胞生长超过汇合状态:哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行,建议细胞密度达 80-90%传代。
6、细胞被支原体污染:将细胞、培养基和试剂丢弃;新取一只冻存细胞,并且使用新的培养基和试剂。
7细胞复苏存活率低:细胞冻存不当,新取一只冻存细胞,并储存在液氮中。将细胞储存在液氮中,直至复苏。自行制备的冻存细胞无活性,将细胞按照生产商推荐的密度冻存。制备冻存细胞时使用传代次数少的细胞。严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞。请注意本手册推荐的冷冻程序是冻存细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。新取一只冻存细胞。
8细胞复苏方法不当:严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞。请注意本手册推荐的解冻程序是复苏细胞的一般流程,只能作为指导原则使用。确保冷冻细胞解冻迅速,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
9复苏培养基使用不当:使用生产商推荐的培养基。确保培养基使用前已经预热。
10细胞稀释过度:按照生产商的建议,将解冻后的细胞高密度接种,以改善复苏效果。
11处理细胞时动作不够轻柔:冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影 响。不要通过涡旋振荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落(培养昆虫细胞时除外),也不要高速离心细胞。
12冻存液中所用保护剂在储存过程中未避光:如果未避光储存,冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质;新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。