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细胞传代注意事项

  
<细胞>
  胰酶消化的过程至关重要。消化过度细胞会粘连拉丝,严重影响细胞活性和后期状态;消化不完全则细胞难以从瓶壁自行脱落,反复对细胞表面进行吹打会损伤细胞活性,导致细胞后期状态差、增值能力低下以及细胞形态发生改变。
 
  影响消化的因素有很多,主 要包括胰酶溶液的活性(配置条件、低温保存时间长短、是否反复冻融,解冻后的存放时间及温度等)、消化细胞时的温度(建议在37°培养箱中消化)、胰酶所加的量(以T25 为例,一个T25 加1ml 胰酶)、细胞的密度(同株细胞不同密度下胰酶对细胞的消化时间也不同,密度稀消化时间快,密度大消化时间相对较慢)等。
 
  不同细胞对胰酶的敏感性也不同,对于新购买的细胞,建议客  户用含0.25EDTA 的胰酶消化液先培养箱持续消化1-2min,镜下观察细胞是否变圆,直至细胞完全脱落或者轻拍瓶壁完全脱落。记录*佳消化时间, 下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。
  
  客户收到细胞时无异常,请在显微镜下观察细胞密度,如贴壁细胞密度未超过85%则继续培养,超过85%时,请按照细胞使用说明书进行传代培养;如为悬浮细胞和半悬浮细胞,具体操作请按照细胞使用说明书进行操作。
  
  我们公司细胞株所使用的胎牛血清为进口胎牛血清货号0500(Sciencell 公司)或ZQ500-A,胰酶消化液货号0103(Sciencell 公司),细胞冻存液货号0133(Sciencell公司),胰酶终止液0113(Sciencell 公司)。
 
   我们公司认为细胞购买者或使用者均有细胞培养经验,客户收到细胞,原瓶里的培养液可以重新收集使用(仅适用于近距离运输的客户)。
 
  在次消化传瓶时,我们建议客户留部分细胞继续使用我们的培养液进行培养,另外一部分细胞客户可使用自己的培养液培养,这样可减少由于细胞不适应培养环境而导致的细胞培养问题,并且能对细胞的培养环境做出对比。