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菌株名称: 栓菌属

菌株编号: GYYC352220

拉丁文名称: Trametes sp.

提供形式: 斜面培养物

其它编号:

安全等级: 1

应用领域: 抗癌活性

生长条件: 28C

价格: 1-1299¥

菌种栓菌属 Trametes sp. 购买价格:1-1299¥
菌种栓菌属 Trametes sp. 购买说明:属于担子菌纲,多孔菌目,多孔菌科,栓菌属。在PDA培养基上生长快,6天就能铺满平板。呈疏松绒毛状,菌落为白色,基内菌丝呈淡黄色,不分泌可溶性色素。气生菌丝长,疏松,绒毛状。3天产孢,圆筒形,无色,无间孢。菌丝直径2.73~5.25µm。菌丝大多数表生,部分内生,有隔。分生孢子梗长,分枝,孢子短圆筒形,无色,无间孢,光滑透明,不串生。
寄主名称:牡丹-茎
模式菌株:no
存储条件:真空冷冻干燥
 
栓菌属原生质体的产生及真菌菌落的再生
 
双核菌株变色栓菌TV-1,变色栓菌380770(可自美国典型培 养物保藏中心获得,拉克维尔,马里兰州,20852)及单核菌株变色 栓菌F2 100(以编号DSM 11972寄存于德意志微生物保藏中心,D -38124不伦瑞克)用以制备原生质体。首先在麦芽—琼脂平板(3 %麦芽汁、0.3%来自大豆粉的肽胨、1.5%琼脂,pH5.0)上、在28 ℃温度下培养7天而制得自变色栓菌的菌丝体。将麦芽—琼脂平板 切割成3片并用以接种于500毫升圆锥烧瓶内的100毫升无菌麦芽 汁培养基(3%麦芽汁、0.3%来自大豆粉的肽胨、pH5.0)或在162cm2细胞培养物瓶内的125毫升无菌培养基。在28℃及不振动的情况下 保温7天直至培养物液体中长出一层密实的菌丝体。将培养物液体 倒出并添加新培养基(对100毫升培养物内的菌丝体添加30毫升)。 用Ultra Turrax(每分钟9500转,4分钟)将该菌丝体加以均质并在 温度28℃及每分钟100转的振动情况下继续保温18小时。
 
在每分钟1500转(2000xg)的情况下利用离心作用将如此制得 的菌丝体悬浮液加以收获,历时5分钟。藉将其悬浮在0.1M MgSO4、 0.6M蒸糖、0.1M磷酸盐、pH5.8(OMT培养基)将如此制得的菌 丝体清洗三次并随后施以离心作用。将分离出来的菌丝体加以称量 并在4℃温度下储存直至用裂解酶加以处理。
 
原生质体是依照下列方法制造:于一无菌圆锥烧杯内,将取自圆 锥烧瓶的菌丝体悬浮在15毫升、新制及无菌过滤的裂解酶混合物 Novozym234(3毫克/毫升,Novo Nordisk公司巴格期维尔德,丹麦) 在OMT培养基中的溶液中。于低速(每分钟80转)下在振动保温 器(Infors公司出品)上,在30℃温度下,将重悬于酶溶液内的菌丝 体保温1至3小时。在保温过程中,在显微镜下观察到原生质体的 形成。1小时之后,正常情况下看到自由移动的原生质体。在显微镜 下,藉目视测定原生质体形成作用的终点。经由玻璃过滤器内的玻 璃绒,藉过滤作用将该等原生质体自其余菌丝体分开。用冰冷OMT 培养基将玻璃绒谨慎地清洗。于一无菌样品管内(每分钟2000转: 2500xg,4℃,10分钟)对悬浮液施以离心作用将原生质体分离出来。 该等细胞的进一步加工是在4℃温度下实施。在OMT培养基内,藉 悬浮作用将该等原生质体沉淀加以清洗,并藉离心作用将之再度分 离出来。必要时,清洗步骤重复实施。原生质体的浓度是于一计数 室内、在显微镜下测得。该原生质体悬浮液是依照原生质体再生或 转化作用的需要调整为1×108原生质体/毫升的浓度。
 
为进行再生实验,由原生质体悬浮液制得一系列的稀释液,并在 琼脂平板(该等平板含有1.5%麦芽汁、0.1%胰蛋白酶解酪蛋白胨, 2%葡萄糖,1.5%琼脂及(为渗透稳定)0.4M甘露糖醇)铺板。以 此方式,活细胞比例得以测定,所得原生质体再生为菌丝生长的可 能性得以测试。以同样方法,渗透作用稳定的细胞(例如:菌丝体 片段)的比例是在无渗透稳定剂(无甘露糖醇)的情况下在平板上 测定。将在28℃下保温7天后制得的菌落加以计数。来自许多原生 质体制品的活细胞的比例约为0.5%。该等结果显示:供作转化作用 的活原生质体及可再生原生质体可自变色栓菌制得。
 
菌种栓菌属 Trametes sp. 购买复苏注意事项:
1 、复苏菌种藤仓赤霉Gibberella fujikuroi前应准备适于该菌种生长的固体、液体培养基和培养设备,所有操作均应在符合生物安全保护及无菌条件下进行。
2 、启开菌种前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开塑盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞,加入0.3mL左右的配套液体培养基,用无菌滴管反复吹吸,将冻干菌种溶解成为悬液,然后用无菌滴管或接种环移至斜面、平板或液体培养基,并连同剩余菌悬液的西林瓶一起放置于36℃培养箱中进行培养。
3 、次日观察菌种的生长情况,如未生长,应继续培养24h,或吸取培养之后的菌悬液中再次接种培养基,培养24h观察。
4、 菌株为一次性使用品,开启之后不能反复使用或保存,暂不开启的菌种应在4℃保藏。
5 、复苏后的菌种在传1-2代后使用,建议菌种使用5代后弃用。
注):购买后请尽量及时使用冻干菌种,如发现菌种不活或污染等情况,请在购买之日起1个月内与
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